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正确解读!新冠病毒核酸筛查稀释混样检测技术指引

2020年7月21日,国务院应对新型冠状病毒肺炎疫情联防联控机制医疗救治组印发了《新冠病毒核酸筛查稀释混样检测技术指引》(简称技术指引)。该技术指引为各医疗机构做好新冠病毒核酸检测工作提供了指导,旨在指导临床更好地应对大规模人群筛查工作。


《技术指引》在朋友圈出现一定程度误解。正确解读《技术指引》及指南、工作手册等相关规范性文件,对于IVD人、核酸检测工作者来说同样重要。



一适用人群明确



《技术指引》适用对象明确:新型冠状病毒核酸筛查稀释混样技术仅适用于大人群样本的筛查,稀释混样检测结果不作为最终确诊依据,在人群总体阳性率较低(低于0.1%)时更为适宜。不适用于(1)重点区域人群(近期有疫情发生的小区含确诊病例和无症状感染者、老旧小区、人口密集小区、流动人口聚集区和近期离省外出人群)、其他不适合稀释混样检测的人群;(2)医疗机构就诊患者。


二操作流程明确


操作流程明确指出样本混合不超过5个,各取200ul进行充分混合,总体积不超过1ml;每一次混样检测,80个孔加入混合样本,划重点:10个孔用于单样本,来源于80X5个原液的随机样本。如果采样常规磁珠法核酸提取试剂盒取200ul样本进行核酸提取,无法避免降低样本浓度,5样本混合后,样本浓度稀释5倍!若采用常规磁珠法核酸提取试剂取200ul样本提取核酸检测,则遇到弱阳性样本(浓度低于1000 copies/ml)混样检测时,大部分厂家试剂无法检出,容易造成漏检!

三混样检测禁用“一步法”


市面上核酸快速释放法新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒采用人内源性(管家基因)内标设计,如果出现PCR抑制,人内源性内标同样会受到抑制,会提示核酸检测员进行样本复查,并不容易造成漏检。此外,《技术指引》建议对试剂检测灵敏度进行评估,选择灵敏度较高的检测试剂。基于混样检测模式,如果出现低浓度(弱阳性)样本(1000copies/ml)时,5个样本混合,该样本浓度稀释5倍则变成200copies/ml。当前获批的大部分核酸检测试剂盒灵敏度低于200copies/ml,当出现弱阳性样本时,容易造成漏检!目前获得NMPA注册审批的新型冠状病毒核酸检测试剂盒性能对比情况如下:


目前市面上灵敏度≤200copies/ml的新冠核酸检测试剂非常少。根据国家卫健委临检中心2020年第一次新冠病毒核酸检测项目室间质评报告,202010号样本(128copies/ml)全国仅有6家实验室检出,圣湘生物2家、达安基因2家、其他2家为实验室自建方法;202002号样本(640copies/ml)全国实验室符合率仅为85.9%,部分厂家试剂符合率更是低于80%。从数据可以看出,部分获证厂家试剂在检测低浓度样本时存在漏检风险。所以,《技术指引》提出建议对试剂灵敏度进行评估,选择灵敏度较高的试剂,当前获批试剂较多,各厂家试剂实际参数不一,核酸检测工作者在实际工作中更应优中选优。圣湘生物有核酸快速释放法、磁珠法、半自动、全自动核酸提取技术用于新型冠状病毒核酸检测,可用于重点社区人群、医疗机构就诊患者、大规模人群混样筛查核酸检测。


(数据来源:国家卫健委临床检验中心全国新型冠状病毒核酸检测室间质量评价结果报告)


新型冠状病毒主要通过呼吸道进行传播,传播速度快,容易出现大规模传播,易出现严重后遗症。混样检测如果出现漏检,容易造成大规模流行,引发社会危害,造成重大经济损失。因此,在大规模人群筛查时核酸检测工作者更应该选择混样后原始样本进行核酸提取扩增检测的检测模式、选择试剂厂家生产或者经过试剂厂家验证的病毒保存液、选择灵敏度更高的检测试剂进行混样检测,尽可能避免混样检测漏检造成的传播风险。



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