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免疫检测,想说爱你不容易

caclp 2019-11-22 09:12:36 显示全部楼层 阅读模式 打印 上一主题 下一主题
免疫检测——过程很艰辛
免疫力低下人群易患肿瘤:肿瘤的发生、发展、复发率和存活期等都与机体的免疫状态有密切关系。人类的免疫系统由免疫器官、免疫细胞、免疫分子和淋巴循环网组成。免疫细胞通过血液循环前往全身各器官和组织。

而免疫检测就是通过对人体外周血中的T淋巴细胞亚群比例变化的定量分析、T细胞抗原受体(T CELL RECEPTOR, TCR)多样性变化的定性与定量分析判断人类个体的细胞免疫应答能力(包括抗肿瘤能力和抗感染能力),并分析其临床意义。

而值得注意的是,免疫检测经常受到病人血液样本中的抗体干扰,这就是内源性干扰。

为何要使用阻断剂?
内源性干扰是免疫检测中无法绕开的现象,消除干扰是免疫检测试剂盒研发中的重要任务,免疫阻断剂是一类添加到体外诊断试剂系统中的物质,能消除或者降低免疫分析中的内源性干扰,提高试剂盒检测系统的灵敏度与精密度。最易受到干扰的有双抗体夹心法、竞争抑制法、IgM检测、免疫比浊、化学发光、胶体金侧向层析等。
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接下来我们看看到底是哪些抗体对免疫检测进行了干扰。

干扰抗体的种类
人抗动物抗体 (HAAA)
  • HAMA (人抗小鼠抗体)。
  • 其它人抗山羊、兔、大鼠抗体等。
  • 产生原因与人类接触不同种属动物有关。
    食物料理、宠物饲养、实验室动物接触。
    饮食接触。
    单抗示踪检测或抗体药物治疗(肿瘤)。
  • 有些情况下具有高亲和力、高浓度的特点。
  • HAAA阳性率依人群不同而有所差异,部分数据表明比例可能超过25% 。

异嗜性抗体
  • 针对不明抗原的多反应性抗体。
    40%人群血液样本中可检测出异嗜性抗体。
  • 具有低亲和力、弱反应性的特点。
  • 能够与待检物竞争检测抗体的结合位点。
  • 加入血清或与检测抗体同种属的纯化抗体可阻断异嗜性抗体的干扰。
    血清或纯化抗体通过中和异嗜性抗体的结合位点阻断干扰反应。


干扰抗体如何影响检测结果?
双抗体夹心法
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双抗体夹心法

竞争法
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竞争法

竞争抑制法
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竞争抑制法

捕获法
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捕获法

类风湿因子RF
  • 许多类风湿、自身免疫疾病患者及健康人群体内均可发现类风湿因子。
  • 类风湿因子(RF)为IgM 型抗体,可识别IgG的Fc段。
    类风湿因子(RF)既可与人IgG结合,也可与其它种属的免疫球蛋白结合。
    类风湿因子与抗原抗体免疫复合物的亲和力高于游离IgG。
  • 为了控制RF因子的干扰,需要在阻断剂中加入抗RF因子的抗体。

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类风湿因子引起的干扰
间接法测IgM抗体
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间接法检测人血清抗原特异性的IgM抗体

假阳性与假阴性
  • 干扰抗体会造成假阳性与假阴性的检测结果。
    双抗体夹心法、竞争法、竞争抑制法及捕获法会不同程度的收到干扰抗体的影响。
    双抗原夹心法受干扰抗体影响较小。
  • 目前已有诸多关于患者由于诊断有误而采取不必要或错误治疗的相关报道。
    案例:美国一位58岁男子在PSA筛查中呈阳性反应,随后进行了3个月的药物治疗,治疗后检测PSA仍然保持在较高水平,但是放射影像结果没有指示肿瘤有任何进展,更换另一品牌PSA检测试剂盒后,该男子PSA正常,分析原因为干扰抗体所致(Nat Clin Pract Urol,2009 Mar;6(3):164-7.)。
  • 美国食品药品监督管理局(FDA)及其他监督机构要求检测实验室和诊断试剂生产企业须对干扰抗体的影响引起重视,开发更加完善的诊断试剂。


有什么方法消除内源性干扰呢?
添加免疫阻断剂是消除内源干扰最简单直接的方法,接下来让我们一起来看看阻断剂的工作原理。

如何消除人抗动物抗体和异嗜性抗体的干扰
人抗动物抗体
异嗜性抗体
  • 干扰抗体的影响代表了真实的抗原、抗体反应。
  • 阻断剂通过中和干扰抗体结合位点或特异性的识别干扰抗体阻断干扰抗体的影响。

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如何消除类风湿因子(RF)的干扰
类风湿因子
  • 高滴度的抗人IgG抗体与IgG免疫复合物/RF因子(IgM型)结合,中和患者血液样本中的IgG和RF因子(IgM型)。
  • 通过中和血清中特异性的IgG抗体,避免了其与血清中特异性的IgM抗体竞争目标抗原。
  • 抗人IgG抗体应具备:
    特异性好。
    低度高。
    能够有效中和患者血液样本中高浓度的IgG。
    与IgM无交叉反应。

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中和IgG免疫复合物/RF因子(IgM型)

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中和IgG免疫复合物

默克阻断剂产品介绍
Super ChemiBlock Heterophile Blocking Agent (CBS)
  • 含有高纯度的主动、被动阻断成分(默克专有配方)。
    - 有效阻断人抗小鼠抗体(HAMA)、RF以及异嗜性抗体的干扰。
  • 适用于对于HAMA以及RF敏感的,使用小鼠来源的双抗体夹心法检测。
  • 不适用于以检测血清中的传染性抗体的双抗原夹心法检测。

Rheumatoid Factor Removal Reagent – RFRR
  • 含有高纯度的绵羊抗人IgG。
    - 有效中和患者血清样品IgG干扰,当IgG浓度高达15mg/mL时依然有效。
  • 特异性高,与IgM的交叉反应性低于0.1%。
  • 适用于检测患者血清中的传染性IgM抗体的检测。
    - 如:弓形虫、风疹、疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒IgM抗体的检测

Goat anti-Human IgG Fc Fragment (AB728)
  • 纯化的山羊抗人IgG Fc段。
  • 与RFRR类似。

PP54-K:鼠IgG(纯化)
从兔血清纯化的多克隆兔IgG。
适用于基于兔抗体及其它与此有种属交叉反应的免疫检测
PP63-K:兔IgG(γ球蛋白组分)
从兔血清纯化的多克隆兔IgG。
适用于基于兔抗体及其它与此有种属交叉反应的免疫检测。
PP64-K:兔IgG(纯化)
从兔血清纯化的高纯度多克隆兔IgG。
适用于基于兔抗体及其它与此有种属交叉反应的免疫检测。
PP41-K:山羊IgG(γ球蛋白组分)
从山羊血清纯化的多克隆山羊IgG。
适用于基于山羊抗体及其它与此有种属交叉反应的免疫检测。
PP441-K:绵羊IgG(γ球蛋白组分,冻干)
从绵羊血清纯化的多克隆绵羊IgG。
适用于基于绵羊抗体及其它与此有种属交叉反应的免疫检测。冻干粉。
PP301-K:马IgG(γ球蛋白组分)
从马血清纯化的多克隆马IgG。
适用于基于马抗体及其它与此有种属交叉反应的免疫检测。

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