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“多快好省”的Taq DNA聚合酶封闭抗体,轻松应对热启动酶应用多场景

2021/7/30 15:54:38 浏览次数:494

非特异扩增是PCR实验中的常见问题,非特异扩增直接影响检测结果的判读并且会导致扩增灵敏度下降,甚至目标片段的得率下降等。


此外,检测试剂的稳定性也是核酸检测行业人格外关注的问题,不管是长期储存稳定性还是短期偏离正常保存条件的稳定性,都直接影响检测结果的有效性。


翌圣匠心开发出一系列“多快好省”的Taq DNA聚合酶封闭抗体可满足热启动Taq DNA聚合酶多种应用场景,同时有效改善扩增的特异性及试剂的稳定性。


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图1. 翌圣Taq DNA聚合酶封闭抗体示意图


图片Taq酶封闭抗体封闭原理
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聚合酶活性封闭抗体可以有效防止错配引起的非特异性扩增,提升全预混反应体系的稳定性,针对5 →3 聚合酶和5 →3 外切酶活性封闭,提高特异性。


翌圣开发的热启动Taq DNA聚合酶单封闭抗体可有效封闭Taq DNA聚合酶的聚合酶活性双封闭抗体既能封闭Taq DNA聚合酶的聚合酶活性又能同时封闭Taq DNA聚合酶的外切酶活性双管齐下,既能有效防止错配或引物二聚体引起的非特异性扩增,又能防止物料降解产生非特异信号,双重提升试剂稳定性


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图2. 翌圣Taq酶单封闭抗体(左)、双封闭抗体封闭原理示意图(右)

图中高亮部分为Taq DNA聚合酶5 →3 聚合酶活性结构域和5 →3 核酸外切酶活性结构域,翌圣双封闭抗体含两种抗体,可同时封闭Taq DNA聚合酶的5 →3 聚合酶活性和5 →3 核酸外切酶活性


图片Taq酶封闭抗体使用方案
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Hieff® 系列 Taq酶单克隆抗体(Cat#31301)不仅可封闭野生型Taq DNA聚合酶,B-Taq、 C-Taq 、 E-Taq 、 J-Taq等多种突变体Taq酶亦可适用,封闭之后的热启动Taq DNA聚合酶可以正常保存至-20℃。


1 μL抗体(5 mg/mL)可封闭20-50 U Taq DNA聚合酶:

 小样室温(25℃)旋转混匀孵育30 min

◎ 大样室温(25℃)旋转混匀孵育2~3 h


图片翌圣封闭抗体产品性能
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单封闭抗体

有效封闭Taq DNA聚合酶活性,助力个位数拷贝检出



利用Hieff® Taq酶单克隆抗体(Cat#31301)优化生成高灵敏度检测试剂Hifair VN nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit(Cat#13122),以某IVD企业ORF1ab和N基因的探针和引物,检测个位数拷贝的假病毒,检出率结果如图。

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图3. 检出率测试:25 μL反应体系加5 μL假病毒,20复孔检测检出率

检出率测试结果显示,500 copies / mL(2.5 copies / rxn)的假病毒检出率为95%。




双封闭抗体

有效封闭Taq DNA聚合酶外切酶活性



将合成的引物探针分别配于未封闭以及双封闭抗体(Cat#31303)封闭的Taq DNA聚合酶的反应液中,40℃反应,检测两者荧光信号。

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图4. 双封闭抗体外切酶活性封闭效率检测

黄色:未封闭的Taq DNA聚合酶组

紫色:双封闭抗体封闭的Taq DNA聚合酶组

由图4可以看出双封闭抗体可有效封闭Taq DNA聚合酶的外切酶活性。




双封闭抗体

“快”速释放酶活


分别用进口T公司抗体和翌圣双封闭抗体(Cat#31303)封闭Taq酶,并在95℃下热激20 s,检测酶活。可以看到95℃热激 20 s后,31303可释放95%以上的酶活,与T公司抗体相当。

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双封闭抗体

有效提升检测试剂稳定性


用传统封闭抗体与双封闭抗体分别封闭Taq DNA聚合酶,配置成含引物探针的全预混液,在4℃放置10天或在37℃放置1、3、5天,扩增10000拷贝ASF质粒,观察扩增曲线和Ct值变化,对比传统封闭抗体和双封闭抗体对全预混反应液稳定性的作用。

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图5. 传统封闭抗体(A)、双封闭抗体(B)封闭反应液扩增10000拷贝ASF质粒扩增曲线图

蓝色:4℃放置10天

红色:4℃放置0天(对照)

由图5可以看出,双封闭抗体比传统封闭抗体更能保持反应液稳定,有效提升检测试剂稳定性。双封闭抗体封闭含引物探针全预混液4℃放置10天扩增曲线和Ct值无明显变化。

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图6. 传统封闭抗体(A)、双封闭抗体(B)封闭反应液扩增10000拷贝ASF质粒扩增曲线图

蓝色:37℃放置5天 

绿色:37℃放置3天

黄色:37℃放置1天 

红色:37℃放置0天(对照)

由图6可以看出,双封闭抗体比传统封闭抗体更能保持反应液稳定,有效提升检测试剂稳定性。双封闭抗体封闭含引物探针全预混液37℃放置1、3、5天Ct值差小于0.2。




双封闭抗体

可封闭“多”种类型Taq酶


翌圣商业化封闭抗体主要是Taq酶单克隆抗体、5 →3 外切酶单克隆抗体和Taq酶单克隆双封闭抗体可供选择,其中用双封闭抗体(Cat#31303)分别封闭三种类型Taq酶(野生型+2种突变型),封闭比例为1μg:5U,测量荧光值以及封闭效率。可以看到,对于不同类型的Taq酶,翌圣双封闭抗体(Cat#31303)封闭效果均较好。

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单克隆抗体

高性价比封闭抗体,“省”去诸多烦恼


圣Hieff® Taq酶单克隆抗体是翊圣生物自研自产的一款高品质热启动封闭抗体,性价比高。小鼠腹水生产,月产量高达40g规模化量产,灵活控制成本。不同于人工操作体外模拟生长环境的罐间悬浮生产,小鼠腹水能提供天然的细胞生长环境,营养充足,有利于杂交瘤细胞的生长。另一方面腹水属于天然免疫系统,抗体折叠修饰翻译更加天然,保证了抗体的结构性能。


图片Taq DNA聚合酶封闭抗体
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翌圣Taq酶封闭抗体除常用的Taq酶单克隆抗体、5 →3 外切酶单克隆抗体和Taq酶单克隆双封闭抗体外,抗体库中还有40余株抗体,后续可快速开发实现超过100余株抗体。多快好省的抗体可针对各种商业化Taq DNA聚合进行定制化筛选服务

当前IVD领域创新合作模式下的定制化筛选模式已然被众多客户所接受。因此,任意提供一款Taq DNA裸酶,翌圣即可从封闭抗体库中筛选出一款最佳的封闭抗体,帮助IVD企业快速适配原料缩短研发进程。

创新合作模式下的定制化封闭抗体筛选,翌圣优势抗体库给您多种选择!

目前翌圣生物为IVD企业已提供的定制化服务除了Taq酶封闭抗体筛选外,其他分子诊断原料包括:免提取、快速程序、自动化仪器适配、小体积反应体系、酶定向改造、防污染体系、冻干试剂等,帮助数百个分子诊断试剂开发项目顺利进行,快速推向临床实验阶段。

如果您对创新合作模式感兴趣,欢迎联系我们探讨交流,我们期待与您的合作。


图片产品信息
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关于翌圣生物

翌圣生物科技(上海)股份有限公司 (Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.) 成立于2014年,长期专注于分子酶原料及建库试剂盒等产品的研发和生产。我们的目标让下游企业节省更多的成本,为中国精准医疗的发展贡献自己的力量。翌圣生物拥有先进的分子酶双向技术平台、大规模蛋白发酵纯化技术平台、高效抗体筛选技术平台,目前已成功开发各类诊断分子酶、二代测序建库酶等40余种,并实现工业放大。翌圣生物开发的用于基因检测、体外诊断(IVD)相关酶原料获得了广大客户的认可。此外,我们还为工业客户提供定制化开发服务,以满足个性化需求。


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